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1. EINLEITUNG 25

PrePro- und der Pro-Lipase zugeordnet werden konnten. Eine vollständige Prozessierung des

PrePro-Enzyms in E. coli findet folglich nicht statt.

Mit der Klonierung der reifen Lipase in E. coli unter die Kontrolle starker Promotoren konnte

eine gute Expressionsleistung erreicht werden. ROL in größerer Menge kann jedoch aufgrund

der Bildung inaktiver Einschlußverbindungen, die erst in einem teuren und zeitaufwendigen

Rückfaltungsprotokoll in vitro renaturiert werden müssen (siehe auch Kapitel 5.5.2.3), so

nicht hergestellt werden.

Parallel zu dieser Arbeit wurde die Expression der ROL in Saccharomyces cerevisiae unter

der Kontrolle der Promotor-Region der Isocitrat-Lyase Genes aus Candida tropicalis unter-

sucht. Es konnte die ProROL (368 Aminosäuren (AS); Molmasse: 46 kDa) und die Lipase mit

verkürzter Pro-Sequenz (299 statt 368 AS; Molmasse 35 kDa) in einem Gemisch erfolgreich

exprimiert und sekretiert werden. Dieses Gemisch entstand durch die unvollständige Prozes-

sierung der Prosequenz durch Saccharomyces cerevisiae. Die Expression und Sekretion der

reifen Lipase (271 AS, Molmasse 30 kDa) mit diesem System gelang jedoch nicht

(Takahashi, et al. 1998).

Tabelle 1.1: Klonierte Rhizopus sp. Lipasen

Lipase Herkunft Wirt Literatur

RDL cDNA E. coli (Haas, et al. 1991)

ROL, proROL, PreProROL cDNA E. coli (Beer, et al. 1998)

ProROL (Beer, et al. 1998) S. cerevisiae (Takahashi, et al. 1998)

RNL mRNA E. coli (Kugimiya, et al. 1992)

1.1.5.4 Verwendung von Rhizopus sp. Lipasen

1.1.5.4.1 Modifikation von Triacylglyceriden

Die Lipasen von Rhizopus sp. zeigen eine strikte 1,3-Regioselektivität (Berger und Schneider

1991, Waldinger und Schneider 1996) in unpolaren organischen Lösungsmitteln (geringe

Acyl-Wanderung; siehe Abbildung 1.4). RDL (Amano D) spaltet beispielsweise den Ester der

1-Position eines Triacylglycerins 76 mal schneller, als den an der 2-Position. Im Vergleich

dazu spaltet die moderat selektive Lipase aus Rhizomucor miehei (RML) dieselbe Position nur

11 mal schneller. Eine detailliertere Übersicht über die Spaltung von Triglyceriden bzw. die

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