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2. ERGEBNISSE 55

Daher wurde als Ausgangspunkt für die Fütterungsstrategie bei Fermentation 4 die von

Invitrogen (Fermentation Guidelines for the methylothrophic yeast Pichia pastoris; Invitrogen,

Ca) für Mut

-Phänotypen empfohlen wird, angewendet. Nach dem Glycerinbatch, dessen

Ende durch ein signifikantes Ansteigen des DO-Wertes detektiert werden konnte (siehe vor-

heriges Kapitel) wurde über 4 h Glycerin zutitriert (1,5 ml min

-1

, 50 % (v/v) Glycerin mit 12

ml l

-1

Spurenelement-Lösung (PTM1)). Nachdem der Fed-Batch gestoppt wurde, stieg der

DO-Gehalt binnen weniger Minuten stark an, daraufhin wurde mit der Zufütterung von

Methanol begonnen.

Zeit (h)

0 20406080100120

DO (%)

100

Flußrate Luft (l min

-1

)

Methanol (g l

-1

)

Abbildung 2.8: Vergleich der Flußrate der Luft (___), des DO-Gehalt (___) im

Fermenter bei Fermentation 4 und dem tatsächlichen Methanolgehalt

( ) bei kontinuierlicher Fütterung mit Methanol.

In den Fermentationen 2 und 3 wurde eine Methanol-Limitierung durch sinken der CO

Emission im A/jointfilesconvert/483621/bgas bzw. des Gehalts an gelöstem Sauerstoff im Fermenter angezeigt. Es

wurde deshalb angenommen, daß dies auch bei der Kultivierung in synthetischem Medium

anwendbar sei. Parallel wurde, um eine zuverlässige Aussage über den Methanol-Gehalt

treffen zu können eine GC-Methode zur Detektion des Methanols entwickelt (siehe Kapitel

2.2.4).

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