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2. ERGEBNISSE 45

2.1.2.1 Durchmusterung verschiedener mit pPICZαA_ROL transformierter Klone auf ihre

Fähigkeit ROL zu produzieren

Die selektierten Zeocin-resistenten Kolonien wurden auf die TMM-Platten transferiert. Nach

24 h Inkubation bei 30 °C wurde zur Induktion der Lipaseproduktion ein Tropfen Methanol in

den Deckel der Petrischale gegeben. Nach 2-3 Tagen, wobei alle 24 h wieder ein Tropfen

Methanol zugegeben wurde, bildete sich um die Kolonien unterschiedlich große Höfe von

denen jene, welche die größten Höfe zeigten, ausgewählt und in 50 ml BMGY Medium

überimpft wurden. Nach dem Erreichen einer OD

600

von 2-6 wurden die Zellen abzentri-

fugiert und in derselben Menge BMMY Medium resuspendiert. Das im Medium enthaltene

Methanol induzierte die Lipaseexpression. Nach 48 Stunden wurde die Lipaseaktivität im

Überstand der einzelnen Kulturen bestimmt.

Abbildung 2.3: Relative Lipaseaktivität einzelner Pichia pastoris GS115 Klone

transformiert mit pPICZαA_ROL.

Die Werte wurden auf eine OD

600

= 15 bezogen.

Beim Überimpfen der Kolonien blieben eine unterschiedliche Menge der Zellen an der

Impföse hängen. So wurde, um die Aktivität vergleichen zu können, angenommen, daß die

100

120

1 1718192223

Klone

1 2 ... 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 ... 152 153

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