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1. EINLEITUNG 37

die Proteinaufreinigung gezeigt werden. Das Fusionsprotein band doppelt so stark an die Ni-

NTA-Matrix (Qiagen), verglichen mit demselben Protein fusioniert mit dem His

-Tag

(Flaschel, et al. 1998).

1.3.2.3.2 HAT

Der HAT Epitop ist ein natürlich in Hühner Lactatdehydrogenase vorkommendes Polypeptid

(19 AS: Lys-Asp-His-Leu-Ile-His-Asn-Val-His-Lys-Glu-His-Ala-His-Ala-His-Asn-Lys)

(Chaga, et al. 1992, Chaga, et al. 1999). Dieser Tag wurde von Clontech insbesondere für ihr

Cobalt-bindendes Talon™ Material weiterentwickelt. Da die in diesem Tag enthaltenen

Histidine nicht in direkter Nachbarschaft zueinander vorkommen, unterliegen sie nicht dem

Patentschutz des His-Tags. Die Ladungsverteilung im HAT-Epitop entspricht eher der natür-

lichen eines Proteins, als im His-Tag. Aus diesem Grund weisen mit dem HAT-Epitop

fusionierte Proteine häufig bessere Löslichkeitseigenschaften auf, als solche, die mit dem His-

Tag fusioniert wurden. Zur Detektion der entsprechenden Fusionsproteine werden häufig

Antikörper eingesetzt. Die für das HAT Epitop spezifischen Antikörper zeigen auf Grund der

"natürlicheren" Aminosäureverteilung häufig bessere Bindungseigenschaften, als die

Immunoglobuline, die zur Detektion von Fusionsproteinen mit dem His-Tag eingesetzt

werden.

1.3.2.3.3 ThioFusion

Das ThioFusion™ System wurde entwickelt von LaVallie et al. (LaVallie, et al. 1993) und ist

mittlerweile kommerziell in einigen Expressionsvektoren von Invitrogen vorhanden.

Abbildung 1.12: Bindung des Thioredoxin an ThioBond™ Material (Invitrogen)

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