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1. EINLEITUNG 38

Neben der einfachen Aufreinigung mit dem ThioBond™-Material (Invitrogen) (Abbildung

1.12) bietet dieser Tag einige weitere Vorteile, wie erhöhte Löslichkeit des Fusionsprotein,

sowie eine verbesserte Thermostabilität und z. T. konnte sogar die Sekretion des Proteins aus

E. coli durch osmotischen Schock erreicht werden.

1.3.2.4 EGFP als Reporter für die Proteinreinigung

Das Enhanced Green Fluorescent protein (EGFP) ist ein Protein aus der Qualle Aequorea

victoria. In dieser ist es dafür verantwortlich die blaue Chemo-Lumineszenz eines weiteren

Proteins, des Aequorins, in grün fluoreszierendes Licht zu verwandeln. Die Gensequenz des

Proteins konnte kloniert werden (Chalfie, et al. 1994, Prasher, et al. 1992) und mittlerweile

erfolgreich in verschiedenen Organismen wie Bakterien, Hefen, Drosophila, Zebrafisch,

Mäusen und anderen Säugerzellen exprimiert werden (Übersicht in: (Yang, et al. 1996)). Die

Struktur des GFP konnte gelöst werden und offenbarte eine neue Proteinstruktur, die

-can.

Diese säulenförmige Struktur besteht aus β-Faltblätten an der Außenseite und α-Helices im

Inneren, die die Fluorophore im Inneren schützen und fixieren und damit auch die Wellen-

längen für das eingestrahlte Licht und die Emission bestimmen (Yang, et al. 1996).

1.3.2.5 Helicobacter pylori – Ausgangspunkt für die Entwicklung einer TagToolbox

Das spiralförmige Bakterium Helicobacter pylori lebt im Magen und dem Duodenum des

Magens. Um in der lebensfeindlichen Umgebung der Magensäfte aus Säure und Verdauungs-

enzymen überleben zu können, bedient sich Helicobacter einer ausgereiften Strategie. Er

siedelt sich in der Schleimhaut, welche die Magenwände vor dem Einfluß des Magensaftes

schützt, ein und erzeugt mit Hilfe einer Urease aus Harnstoff Ammoniumchlorid und Bi-

carbonat. Beide Substanzen puffern die Mikroumgebung um das Bakterium auf neutrale

Werte ab. Der Nachweis der Infektion erfolgt über die Aktivität der Urease. Dem Patienten

wird eine kleine Menge

C oder

C markierter Harnstoff verabreicht. Wird der Harnstoff

von der Urease aus Helicobacter pylori gespalten, so befindet sich

C oder

C haltiges

Kohlendioxid in der Atemluft. Der Nachweis erfolgt über eine Szintillations-Messung bzw.

über Massenspektrometrie, weitere Methoden sind der Bluttest auf H. pylori Antikörper oder

der direkte Nachweis nach einer Biopsie.

In den westlichen Industrieländern sind ca. 50 % der über 60-Jährigen mit dem Bakterium

infiziert. In Entwicklungsländern sind es bis zu 90 % der Erwachsenen. H. pylori steht im

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