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2. ERGEBNISSE 60

Erst 40 h nach Beginn der Induktion konnte zum ersten Mal Lipaseaktivität im Medium

nachgewiesen werden. Trotz der strikten Kontrolle des Methanolgehalts konnte also die Zeit,

bis zur ersten Detektion von Lipaseaktivität im Fermenter nicht signifikant reduziert werden.

Erklärungsmöglichkeiten für diesen Befund sind eine lange Adaptionszeit, beim Wechsel der

C-Quelle von Glycerol zu Methanol, aber auch Verzögerungen bei der Sekretion in syntheti-

schem Medium. Durch die optimierte Fütterung konnte nach 138 h Kultivierung eine

Aktivität von 320 U ml

-1

erreicht werden. Dies entspricht einer Produktivität von

11600 U l h

-1

2.2.6 Kultivierung mit Glycerin-Methanol Mischfütterung

Obwohl der Methanolgehalt im Verlauf von Fermentation 5 (Abbildung 2.11) nie kritische

Werte erreichte, konnte im Überstand erst nach ca. 70 h Fermentationsdauer Lipaseaktivität

(ca. 40 h nach Beginn der Induktion) nachgewiesen werden.

Zeit (h)

0 20 40 60 80 100 120 140

Fütterungsrate Methanol (µl min

-1

)

100

200

300

400

500

600

700

Abbildung 2.12: Vergleich der Fütterungsrate zwischen Fermentation 4, 5 und 6.

In Fermentation 4 ( ) wurde eine Fütterungsrate vorgegeben, während in

Fermentation 5 ( ) die Fütterungsrate vom tatsächlichen Methanolgehalt im

Fermenter abhing. In Fermentation 6 ( ) wurde im Glycerin Fedbatch

schon Methanol zugegeben (12-20 h).

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